家禽的疫病监测方案与检测技术的应用

新疆伊犁特克斯县家禽养殖业比较发达， 是广大养殖者脱贫致富的重要途径。 然而， 由我区的养禽业养殖基础不完善， 养殖技术和疫病防治技术尚不能适应生产发展的需要等因素的影响，禽病的种类和发病数量也长期居高不下，严重影响养禽的健康发展。 很多养殖场（户）往往因为市场因素和疫病问题造成严重经济损失。 还有由于疫病，药物残留等问题，严重影响禽蛋食品安全，危害使用者的健康，成为重大的公共卫生问题。禽病之多， 诊断和防治因素是我区养禽业健康发展的重大问题。 笔者在本文总结了几年实验室工作的经验， 关于禽病检测，诊断的概念，以及在河北农业大学动物疾病诊断中心特培期间对禽病病原学方面接触的一些技术。
1 禽病的检测与检测方案的制定
1.1 禽病与检测的含义
禽病诊断是利用任何可以使用的能够证明疫病或病原存在的工作过程。 包括临床诊断，病理学诊断，血清学诊断，病原学诊断，病原分离鉴定，分子生物学诊断等一种或多种方法，在工作实线中禽病往往呈现出亚临床，非典型临床或者混合感染，仅仅根据临床症状已很难确诊，因此当前对禽病的确诊，实验室工作是必不可少的。
1.2 禽病检测工作内容
禽病检测工作包括以下内容：(1)禽病处于病原感染和保护的状态与水平；(2)禽病发病的原因分析(3)禽病的流行病学现状的分析；(4)提出风险评估报告，帮助制定科学的防疫政策，措施和行动方案。
1.3 明确检测的目的
这可分两种情况， 一是临床症状和流行病学调查可以基本确定检测禽的病种及所要采用的检测方法： 二是血清学检测是一种特异性的检测方法，通过样品中抗原或抗体定性，定位和定量检测，达到临床检查，疾病诊断和流行病学调查。
2 禽病血清学检测项目
禽的抗体检测防治是禽病的重要措施之一， 运用抗原抗体反应原理，采用免疫血清学技术对禽病进行血清学检测，免疫抗体检测。 下面内容是检测几种禽病的检测方法：
新城疫(ND)：检测样品血清，蛋黄。 检测方法血抑或 ELISA检测；禽流感（AI）：检测样品血清，蛋黄。 检测方法血抑或 ELISA检测；禽网状内皮组织增生病(RE)：检测样血清，检测方法 ELISA检测 ；禽肠炎沙门细菌杆菌病 （SE）：检测样品血清 ，检测方法ELISA 检测； 禽传染性贫血 (CA) ： 检测样品血清 ， 检测方法ELISA 检测；禽传染性法氏囊病（IBD）：检测样品血清，检测方法ELISA 检测；禽传染性支气管炎 （IB）：检测样品血清，检测方法ELISA 检测 ；禽白血病(RA)：检测样品血清 ，检测方法 ELISA 检测；禽滑液囊支原体病(MS)：检测样品血清 ，检测方法 ELISA 检测 ；禽败血支原体病 （MG）：检测样品血清 ，检测方法 ELISA 检测；禽霍乱(PM-C)：检测样品血清，检测方法 ELISA 检测；禽呼肠孤病毒病（REO）：检测样品血清 ，检测方法 ELISA 检测 ；禽非病毒病(APO) ：检测样品血清，检测方法 ELISA 检测。
酶联免疫吸附试验（ELISA）是当前应用最广 ，发展最快的一项新技术，其基本过程是状抗原或抗体吸附于固相载体，在载体上进行免疫酶反应， 底物显色肉眼或分光光度计判定结果 。ELISA 具有灵敏度高，特异性强，快速，简便，重复性好，安全，适合大批量标准化检测的特点。
3 禽病病原学检测项目
运用现代微生物学和细菌培养技术， 检测禽的病原检测项目有下面几个内容：
3.1 新城疫（ND） 检测项目新城疫病毒。 检测样品 咽肛拭子，血清，肺，脾，脑等组织检测方法通用型 RT-PCR 检测。
3.2 禽传染性支气管炎（IB） 检测项目传染性支气管炎病毒检测样品咽肛拭子，气管，气管分泌物，脾脏，肺脏等组织，检测方法 RT-PCR 检测。
3.3 禽传染性法氏囊病 (IBD） 检测项目传染性法氏囊病毒检测样品法氏囊，脾脏，咽肛拭子，排泄物等，检测方法 RT-PCR。
3.4 禽流感 (AI ) 检测项目亲流感病毒， 亲流感病毒 H5，H7，H9 亚型 检测样品咽肛拭子，喉气管 ，心肌 ，肺等组织 ，检测方法法通过型 RT-PCR 检测，RT-PCR 检测。
3.5 支原体病(MS/MG) 检测项目支原体，检测样品血清，疫苗成品，半成品，待检细胞，培养基，检测方法 PCR 检测，通用型RT-PCR 检测。
3.6 鸭坦肝炎（DH） 检测项目鸭坦肝炎经典 1 型，鸭肝炎 1型变异性，鸭肝炎 3 型检测样品肝脏，肾脏，脾脏，分泌物，排泄物等 检测方法 RT-PCR。
3.7 鸭布苏病毒病(DTMU) 布苏病毒 （黄病毒 ）检测样品排泄物，肝脏，脾脏，心肌，脑等聚合酶链反应（PCR）是一种体外快速扩增 DNA 的技术。 通过 PCR 可以简便、快速地从微量生物材料中通过体外扩增的方式获得大量特定的核酸，可用于微量样品的检测。 禽病病原检测方面具有灵敏、快速、简便、特异的特点。我区上级部门动物疾病诊断与控制单位也达到了检测应用水平，笔者在河北农业大学动物疫病诊断中心培训期间检测的几项禽病，原理是利用离心柱内硅基质模板 RNA 反转录酶的作用下，以RNA 为模板，以引物为起点合成与 RAN 模板互补 cDNA 链。 在taqDNA 聚合酶的作用下，经高温，低温退火，中温延伸的循环，使特异 DNA 片段的拷贝数放大以倍。 经过 35 次循环，最终使扩增DNA 片段放大了数百万倍。 状扩增 DAN 片段进行电泳，经染色后，在紫外灯照射下肉眼可见到 DNA 片段的扩增带。阳性对照出现 362bp 扩增带，阴性对照无带出现（引物带除外）时，试验结果成功了。