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牛冷冻精液生产操作规程

2018-09-10  yzjidi.com  鱼丸子  阅读:
【文章概要】一.种公牛的饲养管理  种公牛的体质要保持健壮,生殖机能正常,性欲旺盛,精液量多,精子密度大,品质好,使用年限长。  1、成年种公牛饲养管理 (1)饲养。蛋白质、胡萝卜素和矿物质元素直接影响公牛的性欲

  

  一.种公牛的饲养管理

  种公牛的体质要保持健壮,生殖机能正常,性欲旺盛,精液量多,精子密度大,品质好,使用年限长。

  1、成年种公牛饲养管理

 (1)饲养。蛋白质、胡萝卜素和矿物质元素直接影响公牛的性欲和精液品质,因此必须供应充足。成年公牛精、粗饲料的给量标准,可按每100Kg体重每天约1Kg干草和0.5Kg混合精料喂给。在公牛的日粮搭配上,要保证优质豆科干草的给量,控制青贮玉米的给量,因为多汁饲料和粗饲料的过量易形成“草腹”。

 种公牛混合精料推荐配方为:豆粕20%,进口鱼粉5%,麸皮20%,玉米51.3%,骨粉1%,石灰石粉1%,食盐2%,微量元素0.1%,维生素0.1%。

(2)管理。定期称重,每2~3个月称重一次,检查体重变化,以调整饲养管理。每天运动1~2次,共4小时左右。经常检查肢蹄有无异常,每年春秋各修蹄一次,以保证其放牧、配种行动灵活。此外,应保证种公牛充足清洁的饮水,但配种、采精前后或运动前后0.5小时内不宜饮水,以免影响种公牛的健康。夏天注意防暑降温。

  2、育年种公牛饲养管理

 育成种公牛(6~24月龄)正处于快速生长发育阶段,增长速度一般在1.0Kg/d以上,饲养管理不善,影响其生长发育。

(1)饲养。应保证青粗饲料质量,增加精料喂量,以获得较高的日增重并防止“草腹”。日粮应以优质牧草、青贮料、青饲料等为主,但精料应持续饲喂,精料的干物质比例为55~60%。体重200~500Kg的牛,风干物质供饲喂量为体重的3%;体重500~700Kg饲喂量为体重的2%~1.5%。在饲喂豆科或禾本科优质粗料时,精料中粗蛋白质的含量以12%左右为适宜。

  (2)管理。每天要保证2~3小时的运动量;为便于管理,从断奶起就应将育成牛与母亲隔离,单槽饲喂,进行调教,训练口令;要经常刷拭,做到人牛亲和,防止发生恶癖。

  二.采精

  1.场地

   采精场地不能随意变换,以便种公牛建立起条件反射。场地保持宽敞、平坦、安静、清洁。室内附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备,每周消毒一次。

  2.采精前准备

   采精应安排在早饲以后进行。采精前公牛不宜饮水,最好让公牛有轻度运动。采精公牛的牛体保持清洁,采精前须用温水冲洗阴茎,包皮,剪掉过长的阴毛。然后再用灭菌生理盐水冲洗干净。台畜保定在采精架内。台畜的后驱,特别是尾根、外阴、肛门等部位应洗涤,擦干保持清洁。将公牛牵近台牛时,应等待3-5min,在采精员保护下令其空爬,使之有充分的性准备,待性欲高昂时采精。

   将各种器械提前消毒、杀菌准备好。假阴道在使用前要洗涤,安装内胎,消毒,晾干,注水,涂润滑剂,调节温度和压力。注入相当于假阴道内外壳间容积2/3的温水来维持内部温度,在采精时保持38—40℃。集精杯保持34—35℃。注入水和空气来调节压力,应以充气后内胎外口呈现内三角且不凸出为佳。用消毒的液体石蜡或凡士林涂抹假阴道表面增加润滑度。

  3.采精

   采精时,将假阴道与公牛阴茎伸出的方向成一直线、紧靠,并固定于台畜尻部,采取立式采精方式。采精员一般站在种畜的右侧。待阴茎勃起充分时迅速将阴茎导入假阴道内,动作要求迅速、准确。射精时将假阴道集精杯一侧端向下倾斜,以便精液流入集精杯内。当公牛跳下台畜时假阴道随着阴茎后移,放掉假阴道内的空气,阴茎自行软缩脱出后再取下假阴道。

  4.采精频率

   根据种公牛的年龄,体况和季节等影响采集因素,合理安排采精频率,使种公牛的生产潜力得到充分发挥。对育成公牛从14月龄开始采精,隔周采精一次;24月龄以上的成年公牛每周采精2次,每次射精2次,每次采精时隔在40分钟以上。

  三.精液检查

  1.外观评定

  1)云雾运动:牛精液密度大,活力强,精液翻腾呈现漩涡云雾状。

  2)色泽:牛的正常精液呈乳白色或乳黄色。

  2.精子活力

  采精后,用滴管搅匀并从中取一滴滴在载玻片上进行镜检,同时利用,密度仪测密度,活力大于等于70%(0.7)的精液进行稀释。显微镜恒温台或保温箱保持37—38℃。

  四.精液稀释

  1.牛冷冻精液稀释液配方

  主要有卵黄—柠檬酸钠—甘油液;卵黄—糖类—甘油液;奶类—甘油液等。

  1)12%的蔗糖75ml,甘油5ml,卵黄夜20ml;

  2)12%的乳糖75ml,甘油5ml,卵黄夜20ml;

  3)2.9%柠檬酸钠液73ml,卵黄20ml,甘油7ml。

  2.稀释液配制方法

  1)配制冻精用的稀释保护剂,必须用新鲜的双重蒸馏水和卵黄,二级以上的化学试剂。

  2)所用器具,必须达到冷冻精液人工授精技术操作规程的标准,保证清洁,无菌。用前经稀释液冲洗。

  3)稀释液必须保持新鲜。经过消毒,密封可在冰箱里保存一周,但卵黄,奶类,活性物质及抗生素须在用前临时添加。

  4)药品成分要纯净,称量要准确,充分溶解,经过滤后进行消毒。

  5)使用的奶类用在水浴中灭菌(90—98℃)10min,除去奶皮。卵黄要取自新鲜鸡蛋。取前应对卵壳消毒。

  6)抗生素,酶类,激素,维生素等添加剂必须在稀释液冷却至室温时按用量准确加入。

  配制:

  1)配制12%蔗糖(乳糖)溶液100ml:先准确称取蔗糖(乳糖)12g,放入容量为100ml的容量筒内,加入蒸馏水50ml左右,用消毒过的玻璃棒搅拌,等蔗糖(乳糖)溶解后再加蒸馏水至100ml,混匀后用滤纸过滤于三角瓶内,扎好瓶口,置75℃水浴锅中消毒30min。

  2)取冷却后的蔗糖(乳糖)溶液75ml,甘油5ml,卵黄20ml和青、链霉素各(5—10)万单位,加入三角瓶中,用磁力搅拌器充分减半均匀后放入3—5℃的冰箱内待用。但放置时间不能超过24h。

  3.稀释

   取一支盛有30mL稀释液经34℃水浴预先加温的试管,对精液进行稀释,在34℃水浴中暂存10min后加稀释液到最后稀释量。

  1)方法一:再过10min后即可在20℃以下常温实验室操作台上进行精液分装,分装后的细管精液放入不透明的塑料盒内,每盒以盛放300支为宜(遇一头牛的细管数量较大应分放在二个塑料盒中),把塑料盒放入4℃冷藏柜中平衡3h~4h。并在低温柜上盖一条毛巾,避免强光进入低温柜内;

  2)方法二:加完稀释液后,用水杯盛适量的34℃水,把稀释管放入后送4℃低温柜内降温平衡,2h后水杯中加冰块促使其快速降温至4℃(空细管也应降至4℃),再在低温柜中进行细管分装。分装后的细管即可进行冷冻。

  4.稀释倍数

   将经过检查合格的精液(活力0.7以上、精子密度中等)按1:2—5倍稀释液进行稀释,其稀释原则应保证每个颗粒精液中所含精子数不少于3000—4000万个,解冻后呈直线前进运行的精子不少于1500万个。

  五.细管包装

  将稀释好的精液进行灌装打印。

  1)精液塑装前,应将精液摇匀后再缓慢倒入锥形瓶中,精液倒入不要过快以免对精子造成损伤。根据精液量电脑设置0.25ml细管打印数量,编码,打印。

  2)打印后要检查牛号和日期。再灌装,封口。检查封口是否完整无误,罐装完计数过程中发现空管或没吸满的要挑出废弃,在分装时不要与精液接触时间太长以免精液温度回升。

  六.降温平衡和冷冻

  稀释后的精液,采用逐渐降温法。在1—1.5h内,使稀释精液的温度降到4—5℃;然后再在同温的恒温容器内平衡2—4h。平衡、封装后的细管精液上架码放是应注意细管摆放方向,把棉塞封口端靠近操作者,超声波封口端远离操作者,入冷冻仪时亦应如此放置。每架上放上根类似于细管的标记物,一头牛用同一颜色的标记物,便于识别。如同一架上有不同牛的细管精液,要分开码放,两头牛之间要隔开一些距离,以免混淆。

   冷冻仪是全自动冷冻容器。冷冻仪与低温柜应尽量靠近,开启液氮罐阀门把冷冻仪降温4℃,关闭风扇电源,待风扇完全停止后把已排满待冻细管的架子迅速放入冷冻仪,盖严盖子按电脑预先设定好的最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程。如果冻精细管数量不足时,要填充备用塑料管和细管架以保持最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程,确保冻精质量。

   精液冷冻过程中要求温度必须直线下降,不得回升。特别是不得进入精子冷冻-15—-50℃的危险温区,使精细胞内出现冰晶而造成精子死亡。

  七.封装

   当细管温度降至-144℃时,打开冷冻仪盖子,将冻制好的细管冻精取出快速以25支包装单位装入特制的塑料拇指管内,迅速浸入液氮中待检。

  八.冷冻后活力检测

   解冻后在37℃环境下前进运动精子占总精子数的百分率为精子活力。牛冷冻精液的前进运动精子数是评价冻精产品质量的一项重要指标之一。该项指标不仅与受胎率有关,而且关系到冻精产量及优秀种公牛遗传资源的利用率。因此有效精子数要达到国家标准(GB4143-2008)每剂前进运动精子数>1500万个。

   解冻温度如同精液冷冻一样,冷冻精液在融解过程中同样也要顺利通过危险区,不会对精子造成冰晶损伤,目前常用解冻温度为38℃左右,解冻10s即可。用纸将解冻后的精液细管擦干,将精液滴在载玻片上进行镜检,经检查合格的入库保存,不合格的废弃。解冻后精液活力应保持在35%以上。

  九.冷冻精液的保存

  冻结的细管精液,抽样样品经解冻检查合格后,按品种、编号、采精日期、型号标记、包装,转入液氮罐,贮存备用。

  1)冻精应贮存于液氮罐的液氮中,贮存冻精的低温容器应符合GB/T5458标准规定。2)设专人保管,每周定时加一次液氮,保证冻精始终浸在液氮中。3)每头公牛的冻精应单独贮存。4)贮存冻精的容器每年至少清洗一次并更换新鲜液氮。

  

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