绵羊精液冷冻技术

    精液冷冻保存是人工授精技术的一项重大革新。它解决了精液长期保存的问题，使精液不受时间、地域和种畜生命的限制，极大限度的发挥和提高优良种公羊的利用率，加速品种的育成和改良步伐。同时，对优良种公羊在短期进行后裔测定，保留和恢复某一品种或个体公羊的优秀选精特性，以及在进行血统更新、引种、减低生产成本等方面具有重要意义。 

一、采精 
    用假阴道按常规方法采集精液。采精频度，一般采用连续采精2天，休息1天。在采精当日可连续采2次）（间隔10-15分钟）。原精液的活力要求不低于0.8以上。操作规程与常规人工授精相同。

二、稀释 

（一）冷冻精液稀释液的配制
 1、颗粒精液的配方
    9-2号液：I液，取10克乳糖加双重蒸馏水80毫升，鲜脱脂奶20毫升，卵黄20毫升；II液；取I液45毫升，加葡萄糖3克，甘油5毫升。
 2、安瓶精液配方
    葡3-3液：I液，取葡萄糖3克，柠檬酸钠3克，加双重蒸溜水至100毫升，取溶液80毫升，加卵黄20毫升；II液，取I液44毫升，加甘油6毫升。
 3、细管精液配方
    取葡3-3液I液94毫升，加甘油6毫升，再加硒60毫克。
    以上各种稀释液每100毫升另加青霉10万单位，链霉素100毫克。所用的稀释溶液（卵黄除外）需过滤并在水溶中煮沸消毒，甘油单独水汽消毒。稀释液现配现用。

（二）稀释比例
    最终稀释比例（精液于稀释液之比）：颗粒精液为1：1，安瓶精液和细管精液为1：3。

（三）稀释方法
    颗粒精液及安瓶精液采用两次稀释法，细管精液采用一次稀释法。
    一次稀释法：按稀释比例要求，一次稀释并分装和封口，裹8层纱布置3-4度冰箱内降温平衡3小时。
    两次稀释法：先以不含甘油的I液将精液稀释至最终浓度比例的50%，尔后裹8层纱布置3-4度冰瓶或广口瓶内降温平衡（颗粒精液为1-2小时，安瓶、细管精液为2-3小时）后，再用与1液等量的含甘油的II液组第二次稀释。
    精液采出后应尽快稀释，如使用多只公羊的混合精液，或采精时间过长时，需对先采的精液进行预稀释（先加少量的稀释液）每次稀释都应在等温下（精液与稀释液等温）下完成。

三、分装与冷冻

（一）分装封口
     1、在玻璃安瓶或塑料细管上加印精液纺号及冷冻日期等标记。
     2、安瓶精液，经第二次稀释后的精液，立即在3-4度下进行分装（1毫升安瓶）和火焰封口。
     3、细管精液：用5毫升注射器，在室温下分装于0．25毫细管内，并随即用塑料珠或聚乙烯醇粉封口。细管精液不宜过满，封口后中间应保留一定空隙，以防解冻时细管爆裂。

（二）冷冻
    1、颗粒精液
    干冰法：用特制扎孔器或普通玻璃棒在预先摊平，压实的干冰上戳上排列整齐圆光的小孔（直径0．4厘米，深2-2．5厘米）再用滴管吸取稀释混匀的精液，按0．1毫升容量逐穴滴冻，经4-5分钟即可拣取，存放于液氮中。
    液氮法：先将液氮注入12磅广口保温瓶内，随后放置漂浮冷冻器（系用泡沫塑料及120目铜纱自制而成，直径15厘米，高3厘米），铜网面保持低于保温瓶口2-3厘米，以地温温度计测试温度，随时调节漂浮冷冻器铜网与液氮面的距离（约3厘米），确保铜网面温度保持在-80C左右，用滴管吸取精液，按每粒0．1毫升滴冻。加盖停留4分钟后浸入液氮，用小勺收取。精液分批冷冻，第二批滴冻前，需用干纱布将铜网面擦净。
      2、安瓶精液
    葡3-3安瓶精液，由直径25厘米，深20厘米的铝筒，周围加5厘米厚保温材料并固定在特制木箱里的液氮槽和一个直径18厘米，深3-4厘米带网眼的漂浮器制成简易冷冻器，冷冻时，向液氮槽内注入约1升液氮，将约40支安瓶精液平放入漂浮器，置于距液氮面2厘米处，停留7分钟后浸入注入液氮。

  四、解冻

（一）颗粒精液

    干种法：将颗粒放入来菌小试管中（每试管放1粒），在75C-70水浴中融化至还有绿豆粒大小时，迅速取出置于手心中轻轻擦动，借助于温度全部融化。

（二）安瓶精液
    1、葡3-3安瓶精液：取安瓶1支，置60度水浴中摇动8秒钟取出至融化。
    2、细管精液：取细管1支，置70度水浴轻摇8秒钟取出至全部融化。
       冷冻精液解冻后应随即输精。

五、输精

（一）输精制度
    1、颗粒精液，采用每日1次试情，3次输精法。即当日发情母羊于早晚用输精器多输精1次，翌日早晨再输精1次。
    2、安瓶及细管输精：采用每日1次试情，2次输精（早、晚间隔7-8小时），直至发情终止。

（二）输精标准
    1、颗粒精液，解冻后精子活率不低于0．3，输精量为0．2毫升，每一输精剂量中，含活精子数不少于0．9亿个。
    2、安瓶及细管精液，解冻后精子活率要求在0．35以上。葡3-3安瓶及细管精液输精量分别为0．3毫升和0．25毫升。每一输精剂量中含活精子数分别不得少于0．8亿个和0．75亿个。